军曹鱼Hepcidin基因全长cDNA克隆及其组织表达分析

本试验采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)的方法,得到714 bp的军曹鱼(Rachycentron canadum) Hepcidin基因全长cDNA序列。该序列包括213 bp的5'末端非编码区(UTR)、228 bp的3'UTR及273 bp的开放阅读框(ORF),编码90个氨基酸,预测其蛋白分子质量约为10.03 ku,等电点为7.54,预测的蛋白包括信号肽、前肽和成熟肽。通过构建Hepcidin氨基酸序列的系统进化树并进行氨基酸同源性比对,结果显示军曹鱼与已知鱼类及哺乳动物Hepcidin氨基酸的同源性在24.4%~85.6%之间。实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测结果显示Hepcidin基因在正常军曹鱼组织中均表达,但表达量在各个组织中有所不同,其中以肝脏表达量最高。经脂多糖(LPS)和甲醛灭活的鲨鱼弧菌(Vibrio carchariae)刺激后,肝脏、头肾、脾脏中Hepcidin基因表达均上调。     

Performance of Advanced Juvenile Cobia,Rachycentron canadum,Reared Under Different Thermal Regimes: Evidence for Compensatory Growth and a Method for Cold Banking

ABSTRACT

Two trials were undertaken to examine the growth response of juvenile cobia, Rachycentron canadum, at varying temperatures. The initial trial was conducted to determine the effect of various temperatures (18, 23, and 29°C) on weight gain and feed efficiency. The second trial investigated the effect of elevating water temperature in which fish maintained at 18°C and 23°C to a temperature close to their optimum (29°C). The latter study was undertaken in order to determine the effect of thermal shifts upon subsequent growth response of the species. Such information will assist commercial producers in developing various culture guidelines. As anticipated, differences (P < 0.01) in weight gain were recorded among all treatments, although remarkably, feed efficiency did not differ for cobia held at 23°C and 29°C. Following thermal shift, cobia subjected to the largest temperature change (18–29°C) illustrated an immediate growth response, but specific growth rates (SGR) did not exceed that of cobia held at 29°C for the duration of the trial. Nevertheless, when SGR were examined using fish of similar size (i.e., derived from different time points during the study) evidence for growth compensation was obtained. This study illustrates that cobia can be held at reduced temperatures, without detrimental impact on future performance, as a means of maintaining animals at smaller size for production and experimental purposes: “Cold banking.”     

军曹鱼Ig μ重链的全长克隆及在各组织中的定量分析

采用同源克隆和RACE技术,克隆了军曹鱼Igμ重链的cDNA全序列,并通过荧光定量技术分析其在组织中的表达。军曹鱼Igμ的cDNA全长1933bp,3的非编码区域(UTR)为164bp,5UTR为26bp,开放阅读框为1743bp,编码580个氨基酸,分子量为64.831ku,理论等电点6.6。推测的军曹鱼Igμ全长氨基酸序列与已报道的鱼类的相似性最高为60%,最低为30%,同两栖类的相似度在30%~33%,同其他高等的动物相似度不足30%。较保守的CH4区和鱼类相似性在64%~71%,同其他生物的相似度仅为31%~33%,具有较强的物种特异性。军曹鱼Igμ中存在半胱氨酸和色氨酸的保守位点以及FR2骨架区的GKGLEW和在FR3的YYCAR保守序列。Igμ链基因在健康鱼体中除了肾以外在其它各组织中均有表达,在肠中的表达量最高。经鲨鱼弧菌刺激48、96、192h后,在采样的各个组织中均有表达,心脏、鳃、肠道在刺激后48h表达量明显增加,脾脏、胃和脑0h时的表达量较高,肝脏、头肾以及肾脏192h后表达较显著。从时间上看,黏膜免疫屏障最先抵御外来抗原,其后,依次是肝脏、肾、头肾产生免疫应答,说明系统免疫在长时间的抵御外来抗原时发挥着重要作用。     

饲料中添加甜菜碱对军曹鱼生长、体营养成分和血清生化指标的影响

通过8周的养殖试验,评估了饲料中添加甜菜碱对军曹鱼（Rachycentron canadum）生长、体营养成分、血清生化指标和肝脏中酶活性的影响。共设计6种饲料,甜菜碱添加水平分别为0、0．05％、0．10％、0．20％、0．30％和0．40％。结果显示,添加水平为0．05％时增重率（WG）和特定生长率（SGR）最高,肝脏组织状况最好,全鱼和肌肉中蛋白质质量分数最高;添加水平超过0．20％时肥满度（cF）随甜菜碱添加量的上升而下降。各添加组的肝体比（HSI）均显著低于对照组且全鱼和肝脏中（0．10％添加组除外）的脂肪质量分数均低于对照组;血清指标中各添加组的血清甘油三酯（TG）浓度均高于对照组,但随着添加量的提高有先升后降的趋势;肝脏中谷丙转氨酶（GPT）的活性显著低于对照组。由此可见,饲料中添加适量的甜菜碱可以促进军曹鱼的生长,具有一定的降脂作用,利于脂肪代谢。     

军曹鱼NHE3和NKAα1a基因克隆、表达模式及相关miRNA的靶向调控

为了解军曹鱼NHE3与NKAα1a的序列特征、盐度胁迫下的基因表达模式以及相关miRNA的靶向调控作用，实验应用cDNA末端快速扩增技术克隆了NHE3与NKAα1a的全长cDNA序列；应用实时定量PCR (qPCR)技术分析了NHE3和NKAα1a的组织特异性和盐度适应性表达模式；采用双荧光素酶报告实验检测了NHE3和NKAα1a与相关miRNA的靶向调控关系。结果显示，军曹鱼NHE3与NKAα1a基因的开放阅读框长度分别为2 718和3 075 bp，分别编码905和1 024个氨基酸；NHE3、NKAα1a在鳃、肠、心脏等9种组织中均有表达，其中以鳃组织中的表达丰度最高。随着盐度升高，NHE3在鳃中表达量下降，低盐和高盐适应后均呈显著差异。NKAα1a基因表达量随着盐度升高出现不同趋势，在鳃和肠中受低盐和高盐影响后均显著上调，而高盐环境下其在体肾中的表达水平显著下调。在不同盐度适应过程中，NHE3、NKAα1a均以鳃组织中的表达水平最高。NHE3-pmirGLO-WT与miR-1335-3p共转染时，较对照组相对荧光素酶活性下降，并存在极显著差异；NKAα1a-pmirGLO-WT...     

军曹鱼消化系统胚后发育的组织学研究

本文利用连续石蜡切片方法对军曹鱼消化系统胚后发育（1～29日龄）进行了光镜观察。结果表明食道前部内侧纵行肌纤维发达，后部球形粘液细胞更丰富；胃腺的分化较晚，在仔鱼后期(即出膜后8天)才见胃腺细胞团。胃幽门部无胃腺，但具发达的肌层。肠上皮的纹状缘出现较早，1日龄时就可见，而且发育较快，3日龄时很发达。 肠后段黏液细胞明显多于前段和中段。肝脏发育较早，但16日龄仔鱼才开始贮存脂质。胰腺为弥散型，2日龄出现。军曹鱼这些结构特点的变化是与其摄食、消化、吸收的功能相适应的，而且，军曹鱼的摄食方式以及食性也随着消化系统的发育而变化。     

摄食水平对几种重要海水养殖鱼类生长和氮收支的影响

本文研究了不同摄食水平（从饥饿至饱食）军曹鱼幼鱼（平均初始体重10.0g）、青石斑鱼幼鱼（平均初始体重5.5g）和卵形鲳鲹幼鱼（平均初始体重7.7g）的生长和氮收支，建立了生长和氮排泄与摄食水平的回归方程。结果表明，军曹鱼幼鱼特定生长率随摄食水平的增加呈显著增长趋势，在9%和饱食两个摄食水平之间无显著性差异，而青石斑鱼和卵形鲳鲹幼鱼的特定生长率随摄食水平增加呈线性增长趋势；饱食时，青石斑鱼和卵形鲳鲹幼鱼的生长速率接近而明显低于军曹鱼幼鱼的。军曹鱼幼鱼食物转化效率随摄食水平的增加呈先增长后下降的趋势，在9%/d摄食水平组有最大值，而青石斑鱼和卵形鲳鲹幼鱼食物转化效率随摄食水平的增加而持续增长，在饱食摄食水平时有最大值；饱食时，军曹鱼和青石斑鱼幼鱼的食物转化效率接近而明显高于卵形鲳鲹幼鱼的。3种海水鱼摄食氮、排粪氮、生长氮和氮排泄均随摄食水平的增加呈显著增长趋势；比较可知，军曹鱼幼鱼的摄食氮和氮排泄均最大，而青石斑鱼幼鱼的最小。军曹鱼、青石斑鱼和卵形鲳鲹幼鱼饱食和次饱食摄食水平时的氮收支方程分别为100CN = 7.7(6.0)FN + 22.6(31.31)GN + 69.7(62.68)UN、100CN = 2.7(2.8)FN + 20.9(8.4)GN + 76.4(88.8)UN和100CN = 1.8(1.4)FN + 12.8(9.3)GN + 85.4(89.3)UN（氮收支方程括号中的为次饱食数据）；3种海水鱼饱时和次饱食时摄食氮中用于排粪的比例较小且变化不大，军曹鱼次饱食时摄食氮中用于生长的比例较饱食时的大而用于排泄的比例较饱食时的小，青石斑鱼和卵形鲳鲹幼鱼的则相反。因此，鱼类的氮排泄率和氮收支方程存在种间差异，而当食物中氮含量较为接近时，摄食量增大是导致鱼类氮排泄增加的主要原因之一。综合考虑生长、食物转化效率、氮排泄和氮收支方程各因素，可得出在实验的生长阶段，3种海水养殖鱼中，军曹鱼幼鱼的最佳摄食水平为次饱食摄食水平（9%/d或约为饱食摄食水平的70%），而青石斑鱼和卵形鲳鲹幼鱼的最佳摄食水平为饱食摄食水平。     

军曹鱼dnd基因cDNA克隆及其在性腺周年发育过程中的表达

本研究通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆了军曹鱼(Rachycentron canadum)dnd基因(Rcdnd)的cDNA序列,全长1339bp,其中,5'非编码区59bp,3'非编码区173bp,开放阅读框(ORF)1107 bp,共编码368个氨基酸.Rcdnd氨基酸序列含有1段RNA识别保守基序(R...     

军曹鱼幼鱼对吡哆醇的需要量

以初始体重(3.23±0.06)g的军曹鱼为研究对象,以酪蛋白(不含维生素)、明胶、鱼肉浓缩蛋白为蛋白源,在基础饲料中分别添加0、2、4、8、16和32mgPN/kg,配制出6种实验饲料,使饲料中吡哆醇的水平分别达到0.22、1.89、3.87、7.54、14.75和29.88mgPN/kg,研究军曹鱼对吡哆醇的需要量。养殖实验在室内流水系统中(250L)进行,每个处理设3个重复,每个重复放养军曹鱼25尾。养殖实验过程中,海水盐度为30～34,水温28～32℃,溶氧>7mg/L,养殖实验持续9周。实验结果显示,在0.22～3.87mgPN/kg水平范围内,随着饲料中吡哆醇含量的升高,实验鱼特定生长率显著升高,当饲料吡哆醇水平达到或高于3.87mg/kg时,各饲料组实验鱼的特定生长率(2.68～2.71%/d)无显著差异,而都显著高于0.22和1.89mg/kg饲料组的特定生长率(1.17～2.06%/d)P<0.05)。军曹鱼肝脏吡哆醇含量、吡哆醛含量、谷丙转氨酶活力、谷草转氨酶活力均与特定生长率有相似的变化趋势,即在3.87mg/kg饲料组接近或者达到最大值,在达到或超过3.87mg/kg时达到或近似达到一...